Exigences du test du kit Elisa

1. Faites une bonne comparaison

Dans le test formel, les conditions de test doivent être contrôlées avec un contrôle positif et un contrôle négatif respectivement, et les échantillons à tester doivent être fabriqués en double pour garantir l'exactitude des résultats expérimentaux. Parfois, le fond est élevé, indiquant une réaction non spécifique, qui peut être bloquée avec du sérum de chèvre, du sérum de lapin ou de la BSA.

2. Sélection des conditions expérimentales

En ELISA, il est important de choisir diverses conditions expérimentales, notamment :

(1) Sélection du support en phase solide : De nombreuses substances peuvent être utilisées comme support en phase solide, telles que le chlorure de polyvinyle, le polystyrène, le polyacrylamide et la cellulose. Il peut se présenter sous la forme de plaques à puits, de tubes à essai, de billes, etc. Les plaques à puits concaves en polystyrène 40-puits sont couramment utilisées. Quel que soit le support, il peut être criblé avant utilisation : il est enrobé de la même quantité d'antigène, et la réaction est réalisée dans les mêmes conditions expérimentales pour observer si la réaction colorée est homogène, et ainsi déterminer si les performances d'adsorption sont bien.

(2) Sélection de l'anticorps (ou de l'antigène) enrobé : lorsque l'anticorps (ou l'antigène) est adsorbé sur la surface du support en phase solide, la pureté doit être bonne et le pH doit généralement être compris entre 9.{ {2}} et 9,6 pendant l'adsorption. La température d'adsorption, le temps et la quantité de protéines ont également une certaine influence, généralement de 4 degrés pendant 18 à 24 heures. La concentration optimale de revêtement protéique doit être titrée : après le revêtement avec différentes concentrations de protéines (0.1, 1.0 et 10 ug/ml, etc.), et les autres conditions de test sont les mêmes , observez la valeur OD des échantillons positifs. Choisissez la concentration avec la valeur OD la plus élevée et la plus petite quantité de protéines. Typiquement 1-10 ug/ml pour la plupart des protéines.

(3) Sélection de la concentration de travail de l'anticorps marqué par une enzyme : Tout d'abord, titrez le titre initial par la méthode ELISA directe (voir la section anticorps marqué par une enzyme). Ensuite, fixez d'autres conditions ou adoptez la "méthode de la matrice carrée" (le matériau de revêtement, la substance de référence de l'échantillon à tester et l'anticorps marqué par l'enzyme sont à des dilutions différentes) pour titrer avec précision la concentration de travail dans le système expérimental formel.

(4) Sélection de substrats enzymatiques et de donneurs d'hydrogène : la sélection de donneurs d'hydrogène nécessite une réaction de couleur bon marché, sûre et évidente, mais elle-même est incolore. Certains donneurs d'hydrogène (tels que l'OPD, etc.) ont des effets cancérigènes potentiels et doivent être protégés. Ceux qui ont des conditions devraient utiliser des donneurs d'hydrogène non cancérigènes et à haute sensibilité, tels que le TMB et l'ABTS, qui sont des donneurs d'hydrogène relativement satisfaisants. Après que le substrat ait agi pendant un certain temps, un acide fort ou une base forte doit être ajouté pour arrêter la réaction. Habituellement, le temps d'action du substrat est de 10-30 minutes. La solution de substrat doit être fraîchement préparée, en particulier H2O2 doit être ajouté immédiatement avant utilisation.

3. Emballage d'importation :

La plage de détection et la sensibilité sont différentes. Lorsque le dosage est faible, des sous-emballages peuvent être utilisés. Au stade initial, sa durabilité n'est pas très bonne.

La valeur OD du point le plus élevé de la courbe standard du kit était de 2.0±0.2, et la valeur OD du puits zéro était contrôlée en dessous de 0.10 .

Le coefficient de corrélation de la courbe standard R Supérieur ou égal à 0.98 du kit.

La reproductibilité du kit est bonne, et le coefficient de variation dans et entre les plaques est<9>

Les composants des réactifs reçoivent tous un excédent de 20 % pour s'assurer que la détection de 48/96 puits est terminée et pour éviter la situation dans laquelle la quantité de réactifs peut être insuffisante dans la détection fractionnée.

La dilution de l'anticorps de détection et du conjugué enzymatique est appropriée (tous deux 1:30), ce qui est pratique pour l'opérateur de test pour effectuer le travail de dilution avec précision et assure la répétabilité des résultats du test.

L'interleukine-6 est une cytokine qui s'est avérée être un facteur de différenciation des lymphocytes B. C'est un système de formation d'anticorps et ses propriétés physiologiques, telles que l'induction de la synthèse protéique aiguë dans les hépatocytes et la stimulation de la croissance basée sur la synergie avec l'interleukine-3, ont également attiré beaucoup d'attention. Et il a été confirmé qu'il existe une corrélation stable entre l'interleukine-6 et la pathologie. Par exemple, il est rapporté que le facteur de croissance de diverses maladies est l'interleukine-6, et les cellules de myélome peuvent synthétiser l'interleukine-6 et exprimer les récepteurs de l'interleukine-6. De plus, l'interleukine-6 joue un rôle important dans diverses maladies inflammatoires et maladies auto-immunes. Ce kit peut détecter l'interleukine-6 dans le sérum de souris et le surnageant de la matrice cellulaire avec une sensibilité élevée. Principe Ce kit utilise deux anticorps spécifiques. Après avoir lavé la plaque, ajoutez une solution de substrat TMB pour développer la couleur, l'intensité du développement de la couleur est proportionnelle à la quantité d'interleukine -6 chez la souris. Plage de détection 10.94 700 pg/mL Utilisation prévue.