Comment faire fonctionner le kit Elisa

Méthode sandwich double anticorps

1. Revêtement : Diluer l'anticorps à une teneur en protéines de 1-10 ug/ml avec 0.05MPH 9. Tampon de revêtement oxycarbonate. Ajouter 0,1 ml au puits de réaction de chaque plaque de polystyrène, une nuit à 4 degrés. Le jour suivant, la solution dans les puits a été jetée et lavée trois fois avec un tampon de lavage pendant 3 minutes chacune. (appelé lavage, le même ci-dessous).

2. Ajoutez l'échantillon : Ajoutez 0.1 ml d'un certain échantillon dilué à tester au puits de réaction revêtu ci-dessus et incubez à 37 degrés pendant 1 heure. Puis laver. (En même temps, faire des puits à blanc, des puits de contrôle négatif et des puits de contrôle positif).

3. Ajouter l'anticorps marqué par une enzyme : Ajouter 0.1 ml d'anticorps marqué par une enzyme fraîchement dilué (dilution après titrage) dans chaque puits de réaction. Incuber à 37 degrés pendant 0.5 à 1 heure et laver.

4. Ajouter la solution de substrat pour le développement de la couleur : ajouter 0.1 ml de solution de substrat TMB temporairement préparée à chaque puits de réaction et incuber à 37 degrés pendant 10 à 30 minutes.

5. Fin de la réaction : Ajouter 0.05ml d'acide sulfurique 2M à chaque puits de réaction.

6. Jugement des résultats : Les résultats peuvent être observés directement à l'œil nu sur un fond blanc : plus la couleur du puits de réaction est foncée, plus le degré positif est fort et la réaction négative est incolore ou extrêmement peu profonde. Le signe "-" indique. La valeur OD peut également être mesurée : sur le détecteur ELISA, à 450 nm (410 nm si l'ABTS est utilisé pour le développement de la couleur), mesurer la valeur OD de chaque puits après la mise à zéro avec le puits de contrôle vierge, si elle est supérieure à 2,1 fois la valeur OD du contrôle négatif spécifié, qui est positif.

Méthode indirecte

1. Diluer l'antigène connu à 1-10 ug/ml avec du tampon de revêtement, ajouter 0.1 ml à chaque puits et conserver toute la nuit à 4 degrés ;

2. Laver 3 fois le lendemain ;

3. Ajouter 0.1 ml d'un certain échantillon dilué à tester (anticorps inconnu) aux puits de réaction mentionnés ci-dessus, incuber à 37 degrés pendant 1 heure et laver ;

4. (Faire des contrôles de puits blancs, négatifs et positifs en même temps) Ajouter 0.1 ml d'anticorps secondaire marqué par une enzyme fraîchement dilué (anti-anticorps) au puits de réaction ;

5. Incuber à 37 degrés pendant 35-60 minutes, laver ;

6.' Lavage final avec DDW.

Les étapes restantes sont les mêmes que 4, 5 et 6 de la "Méthode Sandwich Double Anticorps".