Требования к тесту Elisa Kit

1. Сделайте хорошее сравнение

В формальном тесте условия тестирования должны контролироваться с помощью положительного контроля и отрицательного контроля соответственно, а образцы для тестирования должны быть изготовлены в двух экземплярах, чтобы обеспечить точность результатов эксперимента. Иногда фон высокий, свидетельствующий о неспецифической реакции, которую можно заблокировать козьей сывороткой, кроличьей сывороткой или БСА.

2. Выбор экспериментальных условий

В ИФА важно выбрать различные экспериментальные условия, в том числе:

(1) Выбор твердофазного носителя: В качестве твердофазного носителя можно использовать многие вещества, такие как поливинилхлорид, полистирол, полиакриламид и целлюлоза. Это могут быть планшеты с лунками, пробирки, шарики и т. д. Обычно используются 40-луночные полистироловые планшеты с вогнутыми лунками. Независимо от носителя его можно проверить перед использованием: на него нанесено одинаковое количество антигена, и реакцию проводят в тех же экспериментальных условиях, чтобы наблюдать, является ли цветовая реакция однородной, и, таким образом, определить, является ли эффективность адсорбции удовлетворительной. хороший.

(2) Выбор антитела (или антигена) с покрытием: когда антитело (или антиген) адсорбируется на поверхности твердофазного носителя, требуется, чтобы его чистота была хорошей, а pH обычно должен быть в пределах 9.{ {2}} и 9.6 при адсорбции. Температура адсорбции, время и количество белка также имеют определенное влияние, обычно 4 градуса в течение 18-24 часов. Оптимальную концентрацию белкового покрытия необходимо титровать: после покрытия разными концентрациями белка (0.1, 1.0 и 10 мкг/мл и т. д.), а остальные условия испытаний одинаковы. , наблюдайте за значением оптической плотности положительных образцов. Выберите концентрацию с самым высоким значением OD и наименьшим количеством белка. Обычно 1-10 мкг/мл для большинства белков.

(3) Выбор рабочей концентрации антитела, меченого ферментом: Сначала оттитруют исходный титр прямым методом ELISA (см. раздел антитела, меченные ферментом). Затем зафиксируйте другие условия или примените «метод квадратной матрицы» (материал покрытия, эталонное вещество тестируемого образца и меченое ферментом антитело находятся в разных разведениях) для точного титрования рабочей концентрации в формальной экспериментальной системе.

(4) Выбор ферментных субстратов и доноров водорода: выбор доноров водорода требует дешевой, безопасной и очевидной цветной реакции, но сам по себе бесцветен. Некоторые доноры водорода (такие как OPD и т. д.) обладают потенциальным канцерогенным действием и должны быть защищены. Те, у кого есть условия, должны использовать неканцерогенные и высокочувствительные доноры водорода, такие как TMB и ABTS, которые являются относительно удовлетворительными донорами водорода. После воздействия субстрата в течение определенного периода времени следует добавить сильную кислоту или сильное основание, чтобы остановить реакцию. Обычно время действия субстрата составляет 10-30 минут. Раствор субстрата должен быть свежеприготовленным, особенно H2O2 следует добавлять непосредственно перед использованием.

3. Импортная упаковка:

Дальность обнаружения и чувствительность разные. Когда дозировка мала, можно использовать суб-упаковку. На начальном этапе его стойкость не очень хорошая.

Значение ОП высшей точки стандартной кривой набора составляло 2,0±0,2, а значение ОП нулевой лунки контролировалось ниже 0,10. .

Коэффициент корреляции стандартной кривой R Больше или равен 0,98 комплекта.

Воспроизводимость набора хорошая, а коэффициент вариации внутри и между чашками составляет<9>

Всем компонентам реагентов дается 20-процентный избыток, чтобы обеспечить полное обнаружение 48/96 лунок и избежать ситуации, когда количество реагентов может быть недостаточным при частичном обнаружении.

Разведение детектирующего антитела и конъюгата фермента является подходящим (оба 1:30), что удобно для точного выполнения работы оператора по разведению и обеспечивает воспроизводимость результатов теста.

Интерлейкин -6 представляет собой цитокин, который, как было показано, является фактором дифференцировки В-клеток. Это антителообразующая система, и ее физиологические свойства, такие как индукция острого синтеза белка в гепатоцитах и ​​стимуляция роста на основе синергизма с интерлейкином -3, также привлекли большое внимание. И было подтверждено, что существует устойчивая корреляция между интерлейкином-6 и патологией. Например, сообщается, что фактором роста различных заболеваний является интерлейкин-6, а клетки миеломы могут синтезировать интерлейкин-6 и экспрессировать рецепторы интерлейкина-6. Кроме того, интерлейкин-6 играет важную роль при различных воспалительных заболеваниях и аутоиммунных заболеваниях. Этот набор может обнаруживать интерлейкин-6 в сыворотке мыши и супернатанте клеточного матрикса с высокой чувствительностью. Принцип В этом наборе используются два специфических антитела. После промывки планшета добавьте раствор субстрата TMB для проявления цвета, интенсивность проявления цвета пропорциональна количеству интерлейкина -6 у мышей. Диапазон обнаружения 10.94 700 пг/мл Ожидаемое использование.